ATCC細胞株穩(wěn)定整合試驗中的幾個關鍵因素

　　ATCC細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標志物的培養(yǎng)物，也就是說，ATCC細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。
　　ATCC細胞株穩(wěn)定整合試驗中的幾個關鍵因素：
　　1)，外源插入片段的拷貝數(shù)。多數(shù)情況下，低拷貝甚至是單拷貝可以減少人為實驗因素的干擾。
　　2)，整合的幾率，這不僅決定了穩(wěn)定株篩選的難易程度，而且還可以幫助人們更容易得到混合穩(wěn)定株。
　　3)，整合位點的轉(zhuǎn)錄活躍度，決定了穩(wěn)定株中外源片段的表達質(zhì)量。理想的狀況是單拷貝，但轉(zhuǎn)錄活性比較高。
　　4)，整合后的穩(wěn)定性。不同的整合位點決定了外源片段在染色體中的穩(wěn)定性，有些區(qū)域易發(fā)生重組或者丟失，從而導致穩(wěn)定株再次丟失的情況。
　　5)，使用混合穩(wěn)定株或者獲得多個不同單克隆穩(wěn)定株。因為穩(wěn)定整合往往伴隨這插入失活宿主內(nèi)源基因，所以實驗時通過使用混合穩(wěn)定株，或者對多個單克隆穩(wěn)定株進行比較，可以幫助研究人員獲得更的實驗數(shù)據(jù)。
　　一個好的ATCC細胞株有多方面要求：
　　1. 產(chǎn)量高，高的產(chǎn)量直接降低固定投資和單次生產(chǎn)成本。
　　2. 產(chǎn)品質(zhì)量符合要求。產(chǎn)品質(zhì)量影響藥效和安全性。
　　3. 穩(wěn)定性。產(chǎn)量和質(zhì)量在生產(chǎn)傳代過程中不應有大的改變。一般認為在60-90PDL產(chǎn)量變化不超過30%是可以接受的。
　　4. 與生產(chǎn)過程的相容性。細胞株需要適合大規(guī)模生產(chǎn)放大。
　　5. 合規(guī)。ATCC細胞株的構建過程應避免接觸或使用動物來源成分或其它可能影響安全性的成分， 保證單克隆性（clonality）以及整個過程的實驗記錄完整。
　　凍存的ATCC細胞株和雜交腐細胞株在運送過程中使用干冰保持低溫。收到細胞后，可以立即解凍復蘇，去除二甲基亞砜（DSMO0）后進行細胞培養(yǎng)。如果不立即復蘇培養(yǎng)細胞，必須將細胞凍存管放置于液氮罐氣相層儲存。請不要將細胞存儲在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低，達不到-130℃，細胞活力會立即下降。
　　ATCC細胞株產(chǎn)品附帶一份產(chǎn)品資料單，其中包含細胞株的信息和詳細的操作指南。細胞株的所有詳細介紹可以在ATCC找到 ，產(chǎn)品資料單也可以在ATCC下載。此外產(chǎn)品還附帶細胞株具體生產(chǎn)批次的檢測報告，其中包含批次的特定信息，如每只凍存管中細胞的數(shù)量，無微生物污染的檢測結(jié)果等。